问题:试剂受温度影响特别严重,随着孵育温度升高,T线和C线均在升高,但是升高比例却不一致,导致相同样本测试完回算浓度差别较大。1. 本项目抗原涉及裂解液,难道是裂解温度越高,蛋白浸出率越高? 如果是这个原因的话,那就有可能是之前的裂解方式并不充分,有可能是裂解时间不够,也有可能是裂解液过于温和,那就可以通过延长裂解时间或者增强裂解效果来验证。 备注:免疫层析裂解液不可以过于剧烈,因为它毕竟是直接参与反应过程的缓冲液,这就需要在裂解效果和反应强度之间做取舍。 如果是这个原因的话,那么是不是可以考虑在裂解液中增加一些组分,可以稳定蛋白原来的构象,使其受温度影响不是那么严重?比如改变缓冲液种类、添加多元醇、筛选表活、增加金属离子或盐离子等。 T线上是一个类似夹心法的反应,游离的抗原作为一个被夹心物质;C线上相当于微球和NC膜直接接触反应,难道是反应模式引发的反应比例的增速不同?如果是这样的话,那该如何调整呢...... 是不是需要找几个C线系统,在不同温度下测试反应增幅,来匹配这个项目的T线的增速呢? 或者说也做成一个夹心的反应模式,比如微球里掺入羊抗鸡标记物,C线位置同样包被羊抗鸡,结合垫位置增加一个鸡IgY垫,来测试反应温度带来的影响。